李玲，徐娟
怀化学院，湖南省怀化市，418000
摘要:目的：是比较两种急性乙型肝炎药物病毒(HBV)之间荧光谱的定量pcr可以检测临床实验室和药物病毒试剂盒的实际临床应用性能。方法：主要是分别采用两种定量HBV在线荧光仪和定量pcr荧光检测的实验试剂盒,对526例的两个临床实验样品分别进行了荧光检测,比较两种实验试剂的检测灵敏度、检测结果的一致性及相关性。结果：两种试剂阳性一致性为97.44%,阴性一致性为95.77%,总一致性为96.77%,两种试剂具有较好的相关性,相关系数,r=0.965。结论：利用HBV一步法检验试剂本身不仅具有设备操作简单、定量准确、灵敏稳定性比较高等几大特点,是一种广泛用于医疗临床上对HBV快速进行定量精确检验的有效试剂。
关键词:肝炎病毒;乙型肝炎病毒;DNA;试剂盒
目录
1.资料与方法 1
1.1一般资料 1
1.2仪器与试剂 1
1.3方法 1
1.3.1血清样本采集 1
1.3.2 HBV DNA检测 1
1.4统计学处理应用 2
2.结果 2
2.1两种试剂检测结果比较 2
2.2两种试剂定量结果一致性分析 2
2.3两种试剂相关性及回归分析 3
3.讨论 3
参考文献 4
目前常见的用于临床应用基因组的分型测序技术主要有多态基因分型测序法、限制性基因内切酶的高长度多态基因分析法、型特异性引物酶的pcr分析法、基因芯片分析法。此类临床技术检验方法的具体操作技术流程均较繁琐,对临床实验室的设备条件和专业技术人员的素质要求也相对较高,临床上很难充分普及。本项目的研究从国内精选两家不同pcr类型试剂盒及工业生产设备厂家分别提供的pcHBVdna两种定量临床检查样品试剂盒,对526例的试剂临床试验样品情况进行了对比研究,比较两种试剂检测性能。
1.资料与方法
1.1一般资料
526例的临床血清样品均是来自于湖南省人民医院的门诊和住院病人,血清样品一般保存在一20℃的冰箱中。
1.2仪器与试剂
HBV一步法高速测定性荧光试剂和高速磁珠反射法测定性荧光试剂(隶属湖南圣湘生物科技有限公司);HBV高速煮沸法荧光测定定性试剂(隶属广州达安基因技术股份有限公司);tdz4-ws高速荧光离心机(隶属湖北湘麓离心机仪器有限公司);ayi7500实时试验荧光法测定量pcr仪(隶属美国国际应用分子生物化学系统公司)。
1.3方法
1.3.1血清样本采集
用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL,注入无菌收集管,室温不超过1h,待样本自行析出血清,或直接室温1600 r/min离心5 min分离血清,转移到1.5mL，灭菌离心管中备用。
1.3.2 HBV DNA检测
HBV DNA一步法与煮沸法提取都严格按照各自说明书进行操作。将煮沸法试剂作为本次研究的对照试剂，其线性范围为100IU/mL-1.00 X108lU/mL,一步法试剂的线性范围为500IU/mL-5.00X109IU/mL，两种试剂的检测下限都为100 IU/mL.，如果检测结果大于检测下限则为阳性，反之则为阴性。
1.4统计学处理应用
spss15.0统计学分析软件主要通过对两种不同试剂的统计检查和检测定量检验结果分别依次进行了定量统计学数据分析,对两种不同试剂的检查定量检验结果中具有相应的定性对比和定量数值分别依次进行了统计f查和检验。
2.结果
2.1两种试剂检测结果比较
采用一步法试剂检测HBV DNA,结果HBV DNA定量大于或等于500IU/mL的样本有285例,100-500IU/mL的样本29例,1一100IU/IU的样本有50例,HBV DNA为0IU/mL的样本162例。采用煮沸法试剂进行检测,结果HBV DNA定量大于或等于500IU/mL.的样本有276例,100-500IU/mL的样本37例,1一100 IU/mL的样本有10例,HBV DNA为0IU/mL的样本203例。
2.2两种试剂定量结果一致性分析
根据两种对照常用试剂盒(采用提取酶方法)的阳性检测提取结果,将526例实验样品组别分为不同阳性对照组和不同阴性对照试剂盒二组,比较两种对照试剂盒的检测提取方法检验结果的准确和性能一致性,发现阳性一致性为97.44%,阴性一致性为95.77%,总一致性为96.77%,见表1。对照实验试剂的阴性检测结果为测试阳性实验结果中,一步法对照试剂中两者共有8例及其样品经经检测及其结果均明确显示样品为实验阴性,这8例样本中,有6例样本检测结果具有明显阳性扩增曲线,但其定量结果低于试剂盒的检测下限。另外2例样本检测结果为阴性,采用磁珠法(检测下限10 IU/mL)对其进行复检,结果显示1例样本为阴性,1例样本为阳性但定量结果仍小于100IU/mL。在对照通例样本试剂对照检验浓度阴性的检测结果中,一步法通例试剂中总共有9例对照通例实验样本试剂检验阳性结果基本均为浓度阳性,其中一步法试剂通例样本试剂盒与对照通例实验的检测结果均虽然具有明确的阴阳性和浓度扩增变化曲线,但是定量分析后的结果比较明显低于对照实验通例试剂盒阳性检测值的上下限。另外5例对照样品使用对照化验试剂的定期检测化验结果均检查呈明显阴性,磁珠分析法的定期复检检测结果表明5例对照样品均检测呈明显阳性,且定量结果大于100lU/mL。
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2.3两种试剂相关性及回归分析
以两种对照试剂的检测结果为依据进行参考,对检验结果均为阴性的313例样品,分别选择相应的对数值后,做出相关性评价。结果显示一步法试剂与其他对照试剂进行定量检验所得的结果之间具有非线性的相关度,相互之间的关联系数 r =0.965;二者的回归方程 y =1.43X+0.096。对两种试剂的检测结果均为阴性的样品做 f 检验,结果表明两种试剂之间的定量结果相同差异没有统计学意义(P>O.05)。
3.讨论
对两种试剂的检测结果均为阴性的样品进行了相关性评价分析,结果表明二者之间的相关性非常高( r =0.965), f检验结果表明两种试剂的定量结果之间的差异没有任何统计学意义(p>0.05),表明两种试剂均可以广泛应用于药物和医疗试剂的临床检测。然而对对照组试剂的检测结果比值小于500iu /ml .的样品进行了分析后发现,两种试剂的定量结果之间的差异比较大。对照试剂检测结果为阳性的样本,一步法试剂检测结果与之基本相符；但对照试剂部分检测结果为阴性的样本,一步法试剂检测结果为阳性,复检结果亦证实这些样本为HBV阳性,这表明一步法试剂具有更好的灵敏度。
参考文献
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[3]刘侯远沛，刘成永，高玉金.乙型肝炎病毒前C区和BCP区突变及基因型对HBeAg表达的影响[J].临床肝胆病杂志，2018(4)
[4]李兵，王敏，徐六妹，等.三种HBV荧光定量PC:R检测试剂的比较及结果分析[J].中华实验和临床病毒学杂志，2018(4):301-304.
李玲，女、1998.9、汉族、湖南省常德市人、本科、制药工程、职称无、研究方向：化学制药，药物合成，生物检测等方面