师丹丹
深圳普门科技股份有限公司 518000
摘要：本文主要以20ng·mL-1，以及100ng·mL-1这两个浓度的NSE检测试剂盒样品为例。运用时间分辨免疫荧光法、化学发光以及电化学发光免疫法、酶联免疫法等方法，测定5种NSE试剂盒的最低检出限、并对线性批间以及批内精密度，以此来进行准确的分析和评价。经过相关实验之后可以发现，5种试剂盒存在着较大的低浓度准确性指标差异，试剂盒不同，其检测结果也存在差异。但是像最低检出限以及精密度等，都能够有效符合检测要求。因此总的来说，国家需要建立关于NSE检测试剂盒的质量检测标准，这样既能够严格控制试剂盒的准确性，同时也能够更好的比较不同试剂盒的检测结果。
关键词:神经元特异性烯醇化酶；试剂盒性能分析；准确性；小细胞肺癌
引言：神经元特异性烯醇化酶，其特性主要体现在神经内分泌细胞和少突化酶，属于yy型烯醇化酶。神经内分泌肿瘤标志物便是NSE的化身。目前，我国已经上市的神经元特异性烯醇化酶检测试剂盒，总共约7种，检测原理主要采用的是时间分辨免疫荧光法等方式。NSE主要被用来治疗小细胞肺癌以及评价脑损伤程度。本文通过测定5种试剂和样品，从而对其测定结果进行考察。
一、仪器和试剂
（一）仪器
目前所使用到的测定仪器包括：Elecsys 2010全自动免疫分析仪；还包括来自于北京德源生物医学工程有限公司的MPC-1型微孔板单光子计数仪；美国公司创造的SpectraMax M2多模式测读分析仪。
（二）试剂和样品
采用时间分辨免疫荧光法检测原理进行检测的，神经元特异性烯醇化酶试剂盒，主要是由广州市达瑞抗体工程技术有限公司提供；其次，运用电化学发光法进行测定的NSE试剂盒，由上海的索灵诊断医疗设备公司提供；北京德源生物医学工程有限公司，提供的试剂盒用来测定化学发光法原理，出自于北京的康乃格技术咨询服务公司试剂盒所，采用的的主要检测原理为酶联免疫法。浙江天航生物科技公司提供新生牛血清；NSE抗原是从芬兰一家公司购置的[1]。
二、检测方法与结果
（一）NSE准确性检测样品的制备
首先，需要稀释NSE样品，准备50支100ng·mL-1检测样品以及20ng·mL-1样品溶液，运用0.05% NaN3的小牛血清稀释液做稀释处理，将稀释之后的溶液放置在零下80度的环境中，做冻干处理。并将此次进行实验的50支试剂检测样品的批号定为20120901。
（二）剂量-反应曲线的范围和线性
运用上述所提到的两种不同浓度的检测样品,用一块96板，按照说明书依次对这两种不同浓度的样品进行加样、孵育、洗板、加入酶标抗体、孵育、洗板、加底物液和显色等操作工序，以此来借助仪器对不同试剂所表现出来的信号强度进行测度。其中，拟合需要按照试剂说明书规定方法进行。拟合的方式分为两种，一种是4参数方式，而另一种是双对数方式，其中4参数方式主要结合的原理为酶联免疫法以及电化学发光免疫法；而另一种方式是以化学发光免疫法和时间分辨免疫荧光法为基础的。
分别以A到E表示5种试剂盒的排序，根据下表的数据表明，检测范围最大可达0~340ng/mL，而5种试剂盒剂量反应曲线最低系数可达0.9957。
（三）最低检出限
按照加样到最后显色的一系列操作工序，对样本稀释液进行10次的操作实验。以此来计算反应量均值()和标准差（s）。与此同时，为了能够对浓度值做相应计算，得出浓度的最低检出限。我们可以在剂量反应曲线当中带入+2s的反应量。经过计算可以发现，A试剂盒的最低检出限分别为0.02、0.01、0.01、0.03ng·mL-1 ,B-C试剂盒的最低检出限分别为0.01、0.09ng·mL-1，D试剂盒最低检出限为0.01、0.07、0.01ng·mL-1，E试剂盒为0.12ng·mL-1。
（四）批内精密度
计算批内精度，RSD也需要对这两种不同浓度的试剂进行10次以上的检测。其中这5种不同的试剂可以划分为10个批次，A试剂盒共有四个批次，用lot1-4表示，D试剂盒有三个批次，用lot1-3表示，剩余的试剂盒都用一个批次表示,以此来进行实验。经过实验之后可以发现D试剂盒在20ng·mL-1样品以及100ng·mL-1样品批内精密度RSD最高达到5.7%和7.2%。
（五）批间精密度
检测这5种试剂的批间精密度需要对不同试剂的不同批次进行10次的重复测定，经过测定实验可以发现，A试剂和D试剂在20ng·mL-1样品中批间精密度为4%和4.1%，而在另一种浓度当中的批间精密，分别为4.6%和2.2%。
（六）准确性
在经过10次对不同试剂不同批次，在两个不相同的浓度之间的检测之后，可以发现A试剂在20ng·mL-1样品中,其测定值与靶值偏差达到4.5%，偏差较小。而D试剂达到了69.2%。因此可以判定其检测结果存在差异；而在另一种浓度样品检测中，C试剂相对偏差为5%，E为-38.5%，也证明试剂盒不同，检测结果也会有所不同[2]。
三、结论
目前，精密度准确性被用来评价肿瘤标志物定量测定试剂盒。顾名思义，精密度主要是指测量结果之间的一致性，而准确性主要指的是测量真值的一致性。只有在准确性和精密性保持一致的前提之下，才能够真实的反映检测结果的水平。神经元特异性烯醇化酶检测试剂盒，主要被用在诊疗小细胞肺癌等疾病中，所使用的检测方法包括酶联免疫法等。对于试剂盒的检测，我国还没有一个统一的标准，再加之厂家不同，其检测标准自然千差万别，因此导致市场上的试剂盒质量参差不齐，难免会造成误诊，延误治疗等不良影响状况的发生[3]。
在本文当中，主要选取了病理状态和生理状态两个高低不同的浓度水平，根据对5种试剂盒的检测结果以及说明书的拟合方式，可以发现都具有良好的线性关系。通过实验可以发现20ng·mL-1样品以及100ng·mL-1样品批内精密度最高可达到5.7%和7.2%，以及拥有小于5%的平均密度。因此表明，试剂盒具有良好的重复性。但是如果将这5种试剂盒放在同一样品的浓度中进行检测，检测结果存在较大波动，最高和最低相对偏差达到了69.2%和4.5%，无法保证准确性和可比性，因此如果用在临床检验当中还是比较危险的。
参考文献：
[1]周新，府伟灵．临床生物化学与检验[M].4版．北京：人民卫生出版社，2010：214
[2]唐燕，姚恩生．同型半胱氨酸、血清胱抑素C与高血压病相关性研究[J]．当代医学，2012，18(11)：6—7
[3]李朝辉,万彦彬,黄子初.血清胱抑素c和尿微量清蛋白的测定在高血压早期肾损害诊断中的临床意义[J]．检验医学与临床，2012，9(3)：315—317．
作者简介：师丹丹 1987年12月，汉族，河南省漯河市，助理工程师，硕士，主要从事体外诊断产品工作。