哈尔滨医科大学附属第一医院泌尿外科研究生1 于俊骁1
哈尔滨医科大学附属第一医院泌尿外科2 王春阳2
【摘要】目的 探讨RASSF10基因在肾细胞癌（RCC）发生发展中的作用。方法 选择在本院诊治的RCC患者37例纳入研究，应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测37例患者肾细胞癌（为甲组）、癌旁组织（为乙组）、正常组织（为丙组）中 RASSF10 基因 mRNA 相对量，应用甲基特异性聚合酶链反应（MSP）检测患者甲、乙、丙组的RASSF10 基因的甲基化状态。研究RASSF10基因在RCC发生发展的作用。结果 甲组RASSF10的mRNA表达水平低于乙组、丙组；甲组的甲基化率71.67%，明显高于乙组35%、丙组30%；RCC组织甲基化的RASSF10 mRNA表达量低于未甲基化的mRNA表达量，差异显著(Ｐ＜0.05)。结论 RASSF10基因低表达水平可能参与RCC的发生发展，给予临床早期诊治有利依据。
【关键词】RASSF10基因；肾细胞癌；mRNA 相对量
肾细胞癌（RCC）为泌尿系统常见的恶性肿瘤，是主要由肾脏泌尿小管发生病变而引起的肿瘤，该病具有较高的发病率且治疗难度极高，在肾脏恶性肿瘤中占比最高[1]。RCC无明确病因，但流行病学研究显示，其与大量吸烟、肥胖、高脂低蔬饮食关系密切[2]。抑癌基因RASSF10是Ras-Association Domain family (RASSF)家族的成员之一，有研究显示，RASSF10 基因启动子高甲基化是甲状腺癌、黑色素瘤及前列腺癌等的潜在抑癌基因，亦可能与RCC存在关联[3、4]。本研究旨在探讨RASSF10在RCC的发生及发展过程中可能的作用。
1资料与方法
1.1一般资料
将2019年2月～2020年2月在本院诊治的37例RCC患者纳入研究，包括男24例，女13例，年龄32～77岁，平均（56.85±6.43）岁。Ⅰ期9例，Ⅱ期19例，Ⅲ期6例，Ⅳ期3例，无淋巴结转移28例，出现淋巴结转移9例。
1.2方法
甲组采集患者术中离体20 min内的病变肾组织；乙组采集距离癌灶３cm处组织；丙组采集正常组织。应用RT-PCR、MSP检测甲乙丙组的RASSF10基因的mRNA 相对量及甲基化状态。
1.3观察指标
密切监测患者肝肾功能、心电图及生命体征。检测与记录甲乙丙组的RASSF10基因的mRNA 相对量及甲基化状态。
1.4统计学方法
采用SPSS22.0统计软件对本次研究数据进行统计学分析。计数资料采用百分比（%）表示，结果采用x2检验。计量资料采用（x±s）表示，结果采用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。
2结 果
2.1 RASSF10在甲乙丙组中的mRNA表达情况
甲组RASSF10的mRNA表达水平低于乙组、丙组，差异显著(Ｐ＜0.05)，但在乙丙组的表达水平无明显差异(Ｐ＞0.05)。见下表。
.png)
2.2甲乙丙组中RASSF10的甲基化情况
甲组的甲基化率71.67%，明显高于乙组35%、丙组30%，差异显著(Ｐ＜0.05)。见下表。
.png)
.png)
2.3 RCC组织中甲基化结果与RASSF10 mRNA表达量的关系
RCC组织甲基化的RASSF10 mRNA表达量为（0.62±0.04）低于未甲基化的mRNA表达量（0.68±0.04）差异显著(t=-8.216，Ｐ=0.001＜0.05)。
3讨论
RCC是泌尿系统常见的恶性肿瘤，全球每年影响超过40万人[5]，受吸烟、环境污染、肥胖、遗传等多种因素的影响，该病发病率不断上升。肾脏为人体特殊器官，通过CT来诊断RCC，并采用手术行根治性肿瘤切除是目前肾脏肿瘤的主要治疗方法，但对于晚期RCC患者手术治疗已经较难取得满意疗效，必须采用联合放、化疗等多种方法，因此，RCC的早期诊断就显得尤为重要。
抑癌基因RASSF10是Ras-Association Domain family (RASSF)家族的成员，RASSF10基因在机体的脑、骨骼、胰腺及心脏等组织中存在，但是在RCC、食管癌和肝癌等出现了甲基化变化，并出现低水平表达[6]。当RASSF10基因表达水平下降或受到抑制，其对恶性肿瘤细胞的抑制作用会随之下降，造成恶性肿瘤细胞快速的分裂增殖，致使患者的临床症状加重，严重影响患者的身心健康及生命安全[7]。在过往的研究中发现RASSF10在不同类型肾癌中表达下降，并且RASSF10的高表达与总生存期相关，低RASSF10甲基化水平有利于肾癌的生存[8]。Chao Wang等[9]的研究中也提出肾透明细胞癌患者的RASSF10低表达水平使TNM分期、sign评分、WHO/ISUP评分升高且生存率降低。本研究结果显示，甲组RASSF10的mRNA表达水平低于乙组、丙组；甲组的甲基化率71.67%，明显高于乙组35%、丙组30%；RCC组织甲基化的RASSF10 mRNA表达量低于未甲基化的mRNA表达量，差异显著(Ｐ＜0.05)。这充分说明RASSF10的甲基化水平，与RCC的肿瘤分期明显相关，早期的RCC中，甲基化率多明显升高。
综上所述，我们的实验结果显示，当RASSF10基因表达水平下降时肿瘤癌细胞会迅速增殖，极有可能参与了RCC的发生与发展，并促进肿瘤转移的发生，此结论给予临床诊疗有利证据，鉴于推广。
参考文献：
References:
[1].樊博等, 肾细胞癌组织中RASSF10基因表达及其启动子区甲基化变化的意义. 山东医药, 2017. 57(21): 第17-20页.
[2].Goossens N, Nakagawa S, Sun X, Hoshida Y. Cancer biomarker discovery and validation. Transl Cancer Res. 2015;4:256–69.
[3].Richter, A.M., G.P. Pfeifer and R.H. Dammann, The RASSF proteins in cancer; from epigenetic silencing to functional characterization. Biochim Biophys Acta, 2009. 1796(2): p. 114-28.
[4].樊博等, RASSF2A基因的甲基化及表达在肾细胞癌中的作用. 河北医学, 2019. 25(03): 第623-626页.
[5].Bray, F., et al., Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin, 2018. 68(6): p. 394-424.
[6].方伟建等, P70S6K在Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌中的表达及临床意义. 临床与实验病理学杂志, 2016. 32(04): 第392-395页.
[7].左莉丽, RASSF10基因在肾细胞癌发生发展中的作用分析. 实用癌症杂志, 2019. 34(01): 第46-49页.
[8].Richter, A.M., et al., RASSF10 is frequently epigenetically inactivated in kidney cancer and its knockout promotes neoplasia in cancer prone mice. Oncogene, 2020. 39(15): p. 3114-3127.
[9].Wang, C., et al., Integration of intratumoral RASSF10 expression and tumor-associated macrophages into the established clinical indicators better predicts the prognosis of clear cell renal cell carcinoma patients. Oncoimmunology, 2020. 9(1): p. 1736793.