韩昶昶1 齐冰青1 朱孟琛2 高天一2
1、天津农学院，天津 300380
2、中国地质大学，北京 100083
摘要：众多文献表明中药组分在抑菌方面有很强效果。本宠物真菌病复方制剂选取的是本国丰富的中草药，中药是组分复杂的活性物质群，能够克服西药单一性的缺点，不易产生耐药性，而且使用方便，价格便宜。测试多种药物成分的结合，进行正交复配，得到成本低廉且实际有效的纯中药复方制剂。
关键词：宠物 中药 真菌皮肤病
1引言
螨病、皮肤真菌病、湿疹是宠物皮肤病的大致的三种类型，而宠物中的常见、多发性的皮肤病是真菌性皮肤病,其主要感染的是宠物的皮肤、毛发和爪子，其中真菌混合感染性皮肤病的感染率最高，患病宠物极度不适，不断抓、咬患部，引起皮肤充血、水肿、发炎，有脱毛、断毛等症状[1]。
真菌病只用外用药不容易治愈,还需配合口服药，内用药有酮康唑、灰黄霉素、多烯类抗真菌药物等，其中多烯类抗真菌药物副作用大,对机体损伤较大[2]。
近半个世纪以来,国内外学者已报道有300多种中草药具有不同程度的抗真菌作用[3],其中多数报道依据实验室抑菌试验结果,少数系临床经验用药[4]。随着宠物皮肤病逐渐成为热点问题，中草药对于皮肤病的治疗也开辟了一条新路径，制作中草药复方制剂可以为宠物真菌病的治疗提供更安全的保障。
2材料与方法
2.1试验材料
2.1.1中草药
丁香、藿香、黄连、大黄、冰片、薄荷冰,全部来自天津农学院药用植物栽培基地。
2.1.2菌种
犬皮肤真菌病致病菌株:天津农学院生物技术实验室提供。
2.1.3PDA培养基
以马铃薯为原材料，按标准步骤制备PDA培养基
2.2方法
2.2.1菌种分离纯化
将原菌种转接在PDA平板培养基上,在28℃下培养48h后,待菌体长出后放入冰箱4℃保存。将平板上的单菌落转接入PDA试管斜面培养基中,在28℃下培养3-5d后，待菌体丰满后再进行一次扩大培养。
2.2.2中药成分提取
称取中药加5倍量75%乙醇浸泡2h,进行超声波细胞破碎,离心,留上清液,药渣进行二级提取,合并滤液,旋转蒸发。
2.2.3制备中药复方药液
分别称取丁香、大黄、黄连、藿香、药膏和冰片、薄荷冰制成浓度为100、200、300、400、500、600mg/mL药液,用相同浓度不同药液等比混合,制备6种药的混合复配液,每种复配药液内所有药物浓度均为100mg/mL。测试每种药的复配方案。
2.2.4平板打孔法测试抑菌性
将活化菌株制成菌悬液,配置PDA固体培养基,待其冷却至40~50℃时将 菌悬液倒入,混匀,制成平板。凝固后打孔，药液加入孔内,每孔50ul。
3结果与分析
3.1菌种分离纯化
宠物真菌1号:在PDA培养基上生长迅速,培养3天菌落表面米色绒毛状，一周后为淡黄色粉状,菌落背部为红褐色,菌落边缘不整齐。
宠物真菌2号:在PDA培养基上生长缓慢，培养一周以后，菌落直径不到2cm,菌落较突出，为白色绒毛状，继续生长会出现树枝状沟纹。
宠物真菌1号染色后，在油镜下观察，可见呈纺锤形的大分生孢子，每个大分生孢子有3-7个间隔，外壁光滑。宠物真菌2号用乳酸苯酚棉蓝染液染色后，在油镜下观察，可见大分生孢子，呈石杵状，中间有1-5个间隔，游离端呈椭圆形，长棒状，孢子壁较厚。
3.2单一抑菌实验
在不同浓度下，六种中药对红色毛癬菌的有抑菌效果。不同中药对红色毛癬菌的抑制效果差异较大，其中大黄的抑制效果最好。在浓度为12.5mg/mL时，均没有抑菌效果。在25mg/mL时，大黄、黄连、薄荷脑开始产生抑菌效果。药物在100mg/mL抑菌最强，抑菌效果由大到小比较为:大黄、丁香、薄荷脑、冰片、黄连、藿香，黄连和藿香抑菌效果相似。
3.3复方制剂抑菌实验
3.3.1两种药物复配实验
从六种药物当中任意挑选两种进行复配实验后，比较得到的抑菌效果。抑菌效果最好的为黄连和薄荷脑组合，最差的是大黄和黄连组合。
3.3.2三种药物复配实验
从六种药物当中任意挑选三种进行复配实验后，比较得到的抑菌效果。抑菌效果最好的为黄连、藿香、冰片组合和黄连、藿香、薄荷脑组合，最差的是藿香、冰片、薄荷脑组合。
3.3.3四种药物复配实验
从六种药物当中任意挑选四种进行复配实验后，比较得到的抑菌效果。抑菌效果最好的为丁香、大黄、黄连、藿香组合和大黄、黄连、冰片、薄荷脑组合，最差的是大黄、藿香、冰片、薄荷脑组合。
3.3.4五种药物复配实验
从六种药物当中任意挑选五种进行复配实验后，比较得到的抑菌效果。抑菌效果最好的为丁香、大黄、黄连、冰片、薄荷脑，最差的是丁香、大黄、藿香、冰片、薄荷脑组合。
3.3.5六种药物复配实验
试验观察可知，100mg/mL的药物复配，6种药物的复配抑菌效果是最强的。
4结论
4.1单一中药抑菌实验中，在药物100mg/mL时，大黄的抑菌效果最好。
4.2实验中，中药较热，由于温度较高，脱离菌的最适生长温度，阻碍真菌生长;另一方面，由于药物的抑菌性，蒸汽带动药物扩散，增加抑菌效果。 4.3实验发现药物的挥发程度对菌的抑制有非常强烈的影响。其中薄荷脑和冰片的挥发性最强，挥发性药物的加入，促进了抑菌效果。
4.4两种药物复配抑菌效果最好的为黄连和薄荷脑组合。三种药物复配抑菌效果最好的为黄连、藿香、冰片组合。四种药物复配抑菌效果最好的为丁香、大黄、黄连、藿香组合。五种药物复配抑菌效果最好的为丁香、大黄、黄连、冰片、薄荷脑组合。六种药物复配抑菌效果在所有复配配方中效果最好。
5参考文献
[1]朱志雄.宠物犬常见皮肤病的防治[J]中国曾医科技，2004,34(12):71-72..
[2]马琪.犬皮肤真菌病治疗药物的筛选与临床疗效试验[D].南京:南京农业大学,2008.
[3]许冰.抗真菌中草药研究概况[J].云南医药 1984,5(1):22-23.
[4]吴广侠.中药外用为主治疗廨病的进展[J]河北中医 1989,11(5):45.