王乐 杨红 唐宇 周良君
（绵阳市疾病预防控制中心；四川绵阳621000）
摘要：【目地】开展室内质控，用质控全血监测CD4+T淋巴细胞计数检测结果的可靠性。【方法】每次做CD4+T淋巴细胞计数检测时均代贝克曼公司购买的全血质控样品同时检测，前20次全血质控CD4+T淋巴细胞计数结果计算本室的均值、标准差、变异系数，建立质控框架图，并绘制质控图。【结果】21次进入质控状态，共有18次，质控图分布正常，实验结果可靠，每次报告均可以发出。【结论】建立切实可靠的室内质控体系，并持续开展室内质控，是保证结果准确性的基础。
关键词：CD4+T淋巴细胞计数检测；室内质控；全血质控样本
Analysis the Internal Quality Control IQC Result of the CD4+T Lymphocyte Cytometry in Mian Yang in 2015
WANG Le, YAO Nan, YANG Hong,
Mianyang City Center for Disease Control and Prevention,Sichuan 621000, China
Abstract:[Objective]Lauch the quality control indoors,to monitor the reliability of the number of CD4+T which used the Quality control of blood.[methods] We tested the CD4+T cell with the Quality control of blood which bought from Beckman Coulter,inc. together, and counted the average number, standard diviation, coefficient of variation, and constructed the quality control chart and painted it at first 20 times in our lab.[result] The test began to being in quality control conditiong at the 21st time, the total number which was in the quality control was18 time, and the quality chart distributed correctly. In summary, the experimental results were reliable, every report can be reported.[conclusion] Constructed the reliable system of quality control indoors, and continue to lauching the quality control, there were basement of ensuring the accuracy of theseresults.
Key words: CD4+T cells testing, quality control indoors, the sample of quality control of blood.
随着我国艾滋病网络实验室建设的不断完善和扩大，艾滋病的实验室检测能力得到了长足的发展，检测力度也不断增大，感染者和病人的发现逐年增多。我市目前已建立艾滋病筛查实验室55个，艾滋病检测点204个；感染者和病人的增加也加大了各疾控中心治疗管理病人的难度，由于目前我国对感染者和病人的免疫状况的判断及是否开始抗病毒治疗主要依赖CD4+T淋巴细胞的计数来决定，我省各地市州均配置了流式细胞仪，甚至有的县上也配制了流式细胞仪，而用流式细胞仪做CD4+T淋巴细胞计数影响的因素也较多，如何保证结果的可靠性，提供有效的检测数据显得十分重要，现将我市2019年艾滋病确证实验室CD4+T淋巴细胞计数检测室内质控结果分析如下：
1材料与方法
1.1样本：室内质控全血在贝克曼公司购买，批号：7587045，效期：20190318；检测样本：绵阳市辖区内所有已确证的HIV感染者和病人。
1.2方法：室内质控样本和病人样本均在常规条件下检测，仪器为美国贝克曼公司的Epics XL流式细胞仪，严格按《全国艾滋病检测技术规范》中相关要求采集运送标本并检测，每次检测前均用Flow-check校正光路和流路（CV值小余2.5%）。
2结果
2.1质控血清随样品一起检测，连续测定同批次质控血清20次后，计算均值x-、标准差S、S/CO值和变异系数CV，以此作为暂定靶值和标准差进行室内质控。20次结果均在x-±2SD内，OCV值为12.56％，可作为RCV参考值贝克曼公司提供的室内质控品的靶值为463±165，我室20次的均值为461，考虑机型、实验环境等条件的不同，均值采用我室自己的均值461，标准差为33，CV值为7%。其结果的准确度精密度均较好，建立质控框架图。
2.2绘制质控图 采用Levey--Jennings质控图法绘制质控图，以室内质控S/CO值为纵轴,不同的检测次数为横轴,前20次室内质控S/CO值的均数为中心线,x-±2SD为警告线，x-±3SD为失控线画出质控图。从21次起检测的室内质控血清S/CO值依次标在质控框架图上，实验进入质控状态见图1从21次开始进入质控状态，共有8次，超过效期（质控品的效期较短都是3个月）有10次，超过效期但在6个月内其结果很好与效期内相同，见表1。
.png)
3讨论
从质控图上可以看到我室的结果可靠准确，实验室检测运行良好，所以全血质控品的使用能够对流式检验前处理及上机检测的一系列连贯过程（包括加样、荧光免疫染色、溶血、洗涤、仪器状态、上机检测时各荧光通道的电压、增益赋值、射门等）进行全程质量监控，这是最有效、最全面的质控措施[1]- [2]；贝克曼公司的全血质控品的效期只有3个月，但从我室超出3个月，但在6个月内的使用情况看，其结果没有变化，鉴于全血质控品价格较贵，可以在6个月内作为检测质量的监控，建议超出6个月后应弃去不用。
CD4+T淋巴细胞计数检测影响因素较多，季节、昼夜以及一些疾病和药物均会使计数有较大的变化，一些自身免疫性疾病和大手术后CD4+T细胞均有减少，尤其是短期内使用激素类药物影响会更大。既使是在排除所有影响因素的情况下，有研究表明有6%的 CD4T细胞计数重复检查的结果是先前的0.5倍或2倍，CD4+T细胞计数用于估计95%正常值范围时，发生错误的机会是30%[3]，基于此用流式细胞仪计数CD4+T细胞就应建立严格的全程质量控制，以确保检测结果的可靠性。
但是，如何体现整个分析过程是否处于所控制的范围内，需要用与新鲜血液类似的质控品和标本平行处理，只有质控品的检测结果在预先确定的可接受范围之内，才能认为整个流式细胞分析过程的各影响因素得到了有效地控制，标本的检测结果才是可靠的，检验报告方可发出。目前，在国外临床流式细胞分析实验室中，主要使用固定的新鲜人全血商业质控品，血液淋巴细胞亚群计数的方法较多，所涉及的多种因素均可直接或间接的影响分析结果的准确度和精密度[5,6]，建立FCM计数血液淋巴细胞亚群的标准化操作规程及质量控制体系是保证检测结果准确、可靠的最有效方法。
3.1 建立切实可靠的室内质控体系，是保证结果准确性的基础：
首先实验室负责检测的人要熟练掌握仪器的使用,平常能对仪器进行简单的维护，定期校正流路和光路，与仪器应用工程师及时沟通，以保证使仪器运行正常，出现问题时在不清楚怎样处理时，最好不要贸然拆机修理，避免问题扩大。定期请仪器厂家校正光电培增管、流路和光路，同时每年校正所有实验中会使用的移液器，并保证生物安全柜的安全运行。
撰写生物安全柜、仪器使用和实验操作的SOP文件，详细、扎实的SOP文件的撰写会了解整个的实验过程，以便操作人员提高自己的检测能力，同时方便临时检测人员尽快能进行实验操作。每个样本均有唯一编号，原始记录、仪器记录和发放的报告能一一对应，所有的资料均保存5年以上。
由于之前我市所有的HIV感染者和病人的CD4+T细胞检测均在我室做，所以年初将检测时间安排表（每月两次）发放给辖区内的各县市区疾控中心艾滋病性病防治科，要求每次采血均在上午12点钟以前，以消除上、下午采血的计数误差，样本的采集和运输严格按《全国艾滋病检测计数规范》的要求做，不合格的样本全部退回。
3.2 建立质控框架图，监测每次实验时仪器的运行状况、实验操作的准确性是保证结果可靠性的必要条件：
检测人员按厂家的要求进行反向加样，要求加样动作熟练，精密度好，掌握好样本前处理的每一个环节，向单位申请购买室内质控全血，每次检测必须代质控样本操作，质控样的结果在控的情况下方可发出报告，如果超出2倍标准差，须溯源查找问题所在，如果问题在允许范围，报告方可发出。
3.3 分析每一个检测结果，扎实的理论基础是保证结果可靠性的重要因素：
每一个实验数据在检测后都要进行分析，尤其是那些计数较低或高或波动较大的结果，分析图形，回顾实验过程，与防治科室沟通了解病人情况，必要时重新实验，结果吻合方可发出报告。
目前CD4+T细胞的测定已广泛用于HIV感染者的临床管理中，协助判断感染者的预后、指导实施抗病毒治疗和疗效观察以及药物预防机会性感染等方面，同时它也是WHO对艾滋病发病定义的金标准，所以有必要掌握有关细胞免疫的相关理论知识，了解T淋巴细胞及其亚型的生理功能以及检测的原理，知晓CD4+T淋巴细胞计数检测容易出问题的每一个环节。
最后，虽然四川省各地市州疾控中心均有流式细胞仪用于CD4+T淋巴细胞计数检测，甚至个别县疾控中心也配制了流式细胞仪用于此项检测，但是怎样保证检测质量显得十分重要，全国艾滋病实验室网络的建设虽然加强了此项工作，但在仪器维护方面存在许多问题，主要表现在：
流式细胞仪由于管道较多等原因，一般使用5-6年以后容易出现问题，而维修费用都较高，疾控自己解决这方面的问题本身有困难，这就为检测的及时性带来问题。是否能从每年的防治经费中用一部分专门用于仪器的维修，以保证仪器长期处于正常的运行中。
参考文献：
[1] Coetzee LM,Tay SS,Lawrie D,janossy G,Glencross DK.From research tool to routine test:CD38 monitoring in HIV patients.Cytometry B Clin Cytom.2009;76(6):375-84.
[2] Bergeron M,Ding T,Elharti E,Oumzil H,Soucy N,Harmouche H,Chaouch S,Aouad RE,Chabot C,Mandy F.Evaluation of a dry format reagent alternative for CD4 T-cell enumeration for the FACSCount system:a repot on a Moroccan-Canadian study.Cytometry B Clin Cytom.2010;78(3):188-93.
[3]Wu DC, Sun QS, Yuan XL, Wang JX. The National AIDS testing work management approach[M]. Bei Jing : China Press of traditional Chinese Medicine,2007.7,15.(In Chinese)
(吴东昌，孙启盛，袁晓雷，王嘉欣等.全国艾滋病检测工作管理办法[M]. 北京：中国中医药出版社，2006.7(15)：124-125.)
[4] 沙丽娜;刘磊;尹松鹤;吕昌武;王彦玲;吴双志。牡丹江市HIV感染者/病人首次CD4+T淋巴细胞检测结果分析[J]. 医学动物防制,2015, v.31(10) 1177-1179
[5]中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范.2009-09-01.
[6] ]中国疾病预防控制中心.艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南.2006-02-01.
[7] 田建池,姜文红,曹威.大连市西岗区1997-2011年艾滋病疫情分析[J].医学动物防制,2014,30(5):520-522.
[8] 吴建英;原福胜; 青海省新发现HIV感染者CD4+T淋巴细胞检测结果分析[J]. 医学动物防,2011, (10) 904-906