都文清1 郭炳豪1 刘雪华1 张若琳1 金新宇1
1.华北理工大学药学院，河北 唐山063200）
摘要：目的：研究草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemarie的化学成分。方法：对草果果实的正丁醇部分进行提取洗脱，蒸发浓缩后进行分离，再利用色谱柱对其进行梯度洗脱，最后得到单体，根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果：从中分离得到1个化合物，鉴定为Vanillicacid，C8H8O4。
关键词：豆蔻属；草果；化学成分；临床应用；药理作用
引言：
草果（Amomum tsao-ko Crevost et Lemarie）为姜科豆蔻属植物，又名草果仁，草果子，草果为多年草本生植物，有些植株的花簇能高达三米，植株有辛香气，叶子形状常见长椭圆形或长圆形，叶两面光滑无毛，蒴果密生，成熟时果实为棕红色，种子一般为多角形，有较浓郁气味。花期在4-6月，果实期9-12月。草果具有悠久的食用药用历史，是我国中药中大宗品种，是一种常用调味品；全植株有十分特殊的香气，可提取芳香油。草果味辛性温，在中药药方中多有应用。具有健胃消食、行气止痛、顺气的功能，常用于治疗心腹绞痛、胸脘痞闷、脘腹胀痛、反胃吐逆、咳喘痰多等，还能够解酒毒，去口臭。
为了进一步阐明草果的化学成分和寻找结构新颖的活性化合物，并为草果中发现的化合物用于以后的临床活性研究做下基础，为其合理开发利用提供科学依据，本论文作者对草果的根进行了较为系统的化学成分的提取分离研究。从果实的30%乙醇提取物中分离得到化合物。通过1HNMR、13CNMR方法，确定了化合物的结构：C8H8O4。
一、仪器及试剂：
1、紫外光谱仪：UV2600型紫外光谱仪。
2、HPLC色谱仪：7890a型HPLC色谱仪。
3、分析型反相色谱柱：YMC-PackODS-AQ型分析型反相色谱柱。
4、质谱仪：赛默飞世尔LCQFleet型质谱仪。
5、高效液相色谱柱：PronaosC18高效液相色谱柱。
6、核磁共振仪：Inova500M核磁共振仪，溶剂峰为内标。Mercury-400核磁共振仪,溶剂峰为内标。sX-600核磁共振仪，溶剂峰为内标。
7、色谱材料：
（1）薄层硅胶：青岛海洋化工厂生产，GF254。
（2）薄层硅胶板：HSGF254。
（3）凝胶：Sephadex-LH20。
（4）ODS硅胶：Rp-C18。
（5）柱层析填料：200-300目。
8、试剂：
（1）分析醇：dichloromethane、Petroleumether、ethylacetate。
（2）分析醇、色谱醇：methanol、acetonitrile、Absoluteethanol。
9、植物来源：草果购自广州药业股份有限公司(2020年5月)，经华北理工大学生药老师陈金铭鉴定为姜科豆蔻属草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire的干燥果实。
二、实验内容：
1、草果有效部位的提取：将草果的干燥果实粉末通过95%乙醇提取得到初步提取物用硅藻吐吸附，使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇进行洗脱，最终得到四个极性不同的提取部位。实验选择正丁醇部位进行分离提取。使用乙醇进行梯度提取，提取梯度为水、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇。实验部分选取30%乙醇提取部位进行分离。
2、草果有效部位的分离纯化：利用大孔、小孔树脂、ODS反向色谱柱、硅胶柱色谱对提取部位进行分离纯化，并使用凝胶SephadexLH–20柱等除去样品的色素，使用薄层板的分离原理把所得样品进行展开合并。利用HPLC-DAD检测纯化，并利用一系列的波谱学方法进行结构鉴定，从中分离出化合物。
3、草果有效部位的筛选：立足于草果的功效以及挥发油类的活性功能，有针对性的筛选体外活性物质。
技术指标：1HNMR、13CNMR、1H-1HCOSY，1H-13CHMQC，1H-13CHMBC，UV高分辨质谱为其平面结构的解析奠定基础，CD谱及X-ray确定其立体结构。
三、研究方法：
建立采用化学筛选，追踪分离的方法，在姜科豆蔻属植物草果中分离得到全新的挥发油类及其他它化合物，对分离得到的单体进行结构鉴定，并选取结构新颖的单体进行生物活性测试，发现具有良好生物活性的单体化合物，为今后药物开发提供数据基础。
三、提取分离:
1、干燥草果果实粉碎，用95%乙醇充分浸泡，此部分进行加热回流3次，将所得部分进行过滤，收集得到浓缩物。
2、取适量的甲醇将浓缩物溶解，经过硅藻土提取后，得到浓缩物。
3、选择草果的正丁醇部分，进行梯度冲洗，分别使用水、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇进行提取，得到30%乙醇部分，60%乙醇部分，95%乙醇部分。
4、选择30%乙醇部位，采用硅胶色谱法，选择二氯甲烷和甲醇作为洗脱剂，分别为CH2CL2-CH3OH的不同梯度比例进行洗脱，浓缩后得到8个流份（C1-C8）。
5、选择C4部分，对其进行硅胶柱层分析（200-300目）170g硅胶进行分离，利用薄层板相似样品进行合并，最终可得10流份（C4a-C4j）。
6、将C4a进入分析型高效液相分析光谱图，后通过制备型高效液相制备，得到化合物。
四、结构鉴定
化合物为淡黄色粉末。EI-MS m/z: 168 [M]+，化合物1的1H-NMR谱图中显示，δ7.56(1H，brs，H-2)，δ7.54(1H，d，J = 8.8 Hz,H-6)，δ6.84(1H，d，J = 8.8 Hz，H-5)，δ3.89(3H，s，-OCH3)。所做的13C-NMR中显示出其碳结构位移δ168.6(C=O)，151.2(C-3)，147.2(C-4)，123.8(C-6)，121.6(C-1)，114.4(C-5)，112.4(C-2)，56.9(-OCH3)。对整个实验中所得化合物的数据进行了分析，在可允许的误差范围内，将所得数据与相关文献数据进行对比，基本一致，确定化合物结构为Vanillicacid，C8H8O4。
五、结论
得到产物为草果果实的95%部分的提取分离化合物Vanillicacid C8H8O4。丰富了豆蔻属化学物质种类，为后续的科学研究奠定物质基础，为药理筛选提供化学支撑，并寻找药效良好的化合物作为合成模板，挖掘其药效价值。为以后姜科豆蔻属植物的研究奠定化学基础。
参考文献
【1】潘晓辉，李硕，李瑜.驼绒藜化学成分研究[J].天然产物研究与开发，2005，17（3）：290-293.