刘晓俊
昆明市食品药品检验所 云南昆明 650032
摘要： 目的 采用UHPLC-MS/MS法测定中成药中西地那非、伐地那非、他达那非。方法 采用Agilent C18 (1.8μm，2.1×50mm) 色谱柱；流速:0.2mL/min ；流动相: A为含0.1%乙酸的0.02mol/L乙酸铵溶液，B相为甲醇,梯度洗脱；柱温35℃。结果 三种物质在所建立的色谱条件下均能较好分离， 在 20ng/mL～200ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.995，平均回收率97.3%～102.0%。结论 该方法前处理简单、选择性强，灵敏度高，可用于测定中成药中3种非法添加的壮阳类化学药物。
关键词：UHPLC-MS;伐地那非;西地那非;他达那非;保健品
中成药是按照一定的配伍原则，由多味中药材配伍制成，具体多作用靶点的特点[1]。中成药相对化学药物起效时间慢，服药周期长。在巨大利益驱使下，一些不法商贩, 为追求短期效果，在一些中成药中非法添加化学物质，对患者用药安全造成极大威胁。由于中成药成分复杂，色谱杂峰多，传统高效液相色谱法[2]容易受到干扰。采用UHPLC-MS/MS法定性能力强，可大大提高方法可靠性和抗干扰能力。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
Agilent 1290 液相色谱仪，AB 4000-QTRAP三重四级杆质谱仪；梅特勒 MS 205DU电子分析天平；UV24超纯水机。
伐地那非：德国 Dr．Ehrenstorfer 公司，含量为95%，批号为21127 ；他达拉非：德国 Dr．Ehrenstorfer 公司，含量为99.5%，批号为21130；西地那非( Sildenafil)：中国药品生物制品检定所，含量为99.9%，批号为510068-201401；甲醇：德国默克股份两合公司
1.2 方法
1.2.1 对照品溶液的制备
取对照品约10mg，置于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml到100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制备成1ml含1ug的混合溶液，即得。
1.2.2 供试品溶液的制备
供试品固体制剂，精密称取一次服用量，研细后转移至50ml量瓶中，加甲醇约40ml，超声处理15min，冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
1.2.3 色谱条件
色谱柱: Agilen C18 (1.8μm，2.1×50mm) ；流速：0.2mL/min ; 进样量:5μL; 柱温:35℃; 流动相: A相为含0.1%乙酸的0.02mol/L乙酸铵溶液，B相为甲醇，梯度洗脱（0～0.5 min，45～12% A；0.5～5 min，12 A；5～6 min，12%～45% A；6～7 min，45% A）
1.2.4 质谱条件
电喷雾离子化源（ESI），毛细管电压5.5KV，离子源温度550℃，雾化气55psi，加热气55psi，正离子模式扫描测定。60 ng/mL的标准溶液MRM色谱图见图一。
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图一 3种药物的MRM色谱图
A：他达拉非；B:西地那非；C：伐地那非
2 结果与分析
2.1线性范围和线性方程
配制浓度为20、60、120、150、200 ng/mL的标准溶液，分别进样10 uL。计算回归方程，伐地那非y=15264.51584x+1.09651e5（r=0.99712）,西地那非y=10421.02333x+5.65907e4（r=0.99753）.他达那非y=4494.83614x+738.32416e4（0.99911），线性范围均为：20～200ng/mL。3种成分的相关系数均大于0.995，表明西地那非、他达拉非、伐地那非在上述浓度范围内线性良好。
2.2 精密度试验
精密量取浓度为60 ng/mL的标准溶液，连续进样5次。记录色谱图和峰面积，结果表明西地那非、伐地那非、他达拉非峰面积RSD分别为0.80%、1.5%、0.95%，RSD结果均小于2.0%，仪器精密度良好。
2.3回收率试验
取阴性样品，在其中加入1.2.1项下对照品溶液适量，照1.2.2项下方法处理。西地那非平均回收率99.10%，RSD为1.01%，伐地那非平均回收率102.00%，RSD为1.15%，他达那非平均回收率97.30%，RSD为1.34%。
2.4 定量限和检出限
按照1.2.2方法处理，分别稀释成各浓度检测，以信噪比为3的溶液浓度计算各待测物的方法检出限，以信噪比为10的溶液浓度计算各待测物的方法定量限， 西地那非、伐地那非、他达拉非定量限分别为9.3ng/L、8.1 ng/L、1.1 ng/L，检出限分别为4.1 ng/L、3.4 ng/L、0.6 ng/L。
2.5 样品测定
本次研究共检测抗疲劳壮阳类中成药5批次。取各品种样品，按“1.2.2”项下方法制备供试品溶液， 按“1.2.3”和“1.2.4”项下色谱、质谱条件分别进样测定，其中1批样品检测出色谱峰保留时间与西地那非对照品一致的化合物，且该色谱峰的一级质谱及二级质谱碎片离子均与对照品一致，表明这批样品含有西地那非成分。
3 讨论
本实验采用UHPLC-MS/MS法同时测定中成药中非法添加的3种抗疲劳壮阳类药物。具有操作简便、适用范围广、灵敏度高、准确、快速的特点。为打击中成药非法添加化学药物行为提供有利依据，保障了患者的用药安全。
参考文献
[1]中医药发展研究报告课题组．中医药保健产业成为我国经济新增长点[N]．中国中医药报，2010—4—30(003)．
[2] 张朝辉,康绍英,许敏洁,等.液-液-液微萃取/高效液相色谱法测定人血浆中的西地那非和伐地那非[J].色谱, 2005, 23(4): 358-361.
作者一姓名：刘晓俊；性别：男；出生年月：1986.11；籍贯云南省昆明市：（具体到市）民族汉族；最高学历硕士研究生：；目前职称：主管药师；研究方向：药品检验，化妆品检验