谭永翠，闫汉语，徐芳芳，高 远*
贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025
摘要：目的：比较隔药灸所用苗药的不同特性对模型家兔穴位部位神经递质释放的影响，探索苗药隔药灸治疗时，其辛热特性对穴位的刺激作用。方法：卵蛋白法制备类风湿性关节炎家兔模型，随机分为空白组、艾灸组、辛热苗药-三百棒组、辛热苗药-白条松组、平性-青风藤组、寒性-三加皮组，空白组只造模不干预，艾灸组采用直接灸的治疗方式，药物组隔药灸治疗，ELISA、PCR方法检测穴位刺激相关神经递质——SP（P物质）、CGRP（穴位局部降钙素相关蛋白肽）含量，比较穴位刺激作用强度。结果：ELISA检测表明，与平性药青风藤、寒性药三加皮相比，辛热苗药三百棒、白条松作为隔药灸用药促进穴位部位SP、CGRP更具显著性(P<0.05)。PCR检测表明，与平性药青风藤相比，辛热苗药三百棒、白条松的SP具显著性(P<0.05)；与寒性药三加皮相比，辛热苗药三百棒的CGRP具显著性(P<0.05)。结论：两种常用辛热苗药与平、寒性苗药相比，促进神经递质释放的能力均存在显著差异，具有更强烈的穴位刺激作用。
关键词：辛热苗药；隔药灸；穴位贮库效应；类风湿关节炎家兔
Study the effect of acupuncture point stimulation after a moxibustion with pungent-hot Miao medicine based on the theory of "acupuncture point reservoir effect"
Tan Yongcui, Yan Hanyu, Xu Fangfang, Gao Yuan*
(GuiZhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550025, China)
Abstract: Objective: To compare the effects of the different characteristics of Miao medicine moxibustion on the acupoints of rabbit models. Methods: The rabbit model of rheumatoid arthritis was prepared by the ovalbumin and randomly divided into blank group, moxibustion group, sanbaibang group, baiotaiosong group, qingfengteng group and sanjiapi group. The contents of SP and CGRP , the neurotransmitters related to acupuncture point stimulation were detected by PCR and ELISA, and the intensity of the acupuncture point stimulation produced by different medicinal seedling drugs was compared. Results: The ELISA test showed that the SP and CGRP after moxibustion with pungent-hot Miao medicine(sanbaibang and baitiaosong)were significantly higher (P<0.05) than colds-Miao medicine (Sanjiapi and baitiaosong). The PCR test showed that the SP after moxibustion with pungent-hot Miao medicine(sanbaibang and baitiaosong)were significantly higher (P<0.05) than colds-Miao medicine(qingfengteng), and the CGRP after moxibustion with pungent-hot Miao medicine (sanbaibang) was significantly higher (P<0.05)compared with the cold-Miao medicine Sanjapi. Conclusion: Based on the two assays, the two commonly used pungent-hot Miao medicine are significantly different from the cold Miao medicine, pungent-hot Miao medicine with stronger acupressure effects.
Keywords: pungent-hot Miao medicine, medicine-separated moxibustion, acupoint depot effect, rabbit model of rheumatoid arthritis
隔药灸是传统灸法中的一种，在艾灸的基础上又增加药物“经穴”吸收，其免疫调节作用比单纯艾灸更具有优势[1-2]。以单味药制成“药饼”贴敷穴位部位进行治疗，与苗药的单味用药、外敷使用的方法相统一，以苗药作为隔药灸所用之药便于发挥二者优势。但是，目前仍存在作用机制不明确，用药规律不清楚等问题。本项目以类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）为模型，选择使用频率较高的辛热性苗药三百棒，白条松为实验组，以平性苗药青风藤，寒性苗药三加皮作为对照组。通过对其刺激穴位释放的SP、CGRP量的检测来定量判断辛热苗药、寒性药、平性药在隔物灸条件下对穴位刺激强度。期望比较相关神经递质的释放量，探索不同药性苗药对穴位刺激的影响。
1 仪器与试剂
FA2204型电子天平（上海菁海仪器有限公司）；Synergy-H1全功能酶标仪（美国伯腾仪器有限公司）；ABI7500全自动荧光定量PCR仪（美国Applie Biosystems）苗药材（同济堂）；弗氏完全佐剂（美国Sigma 公司,F5881-10mL）；卵蛋白（美国Sigma公司,A5253）
2.方法
2.1 动物模型建立及分组：卵蛋白法建立家兔RA模型，随机分为6组，每组6只，A空白组；只造模不干预；B直接艾灸组；C隔热性药三百棒艾灸组；D隔温性药白条松艾灸组；E隔平性药青风藤艾灸组；F隔凉性药三加皮艾灸组。
2.2 模型动物的干预：模型动物后肢背外侧，胫骨粗隆下部外约0.3cm处定位家兔足三里穴位，除去足三里穴位附近的绒毛，隔物灸治疗30min。
2.3 样本采集：取足三里穴部位0.9×0.9×0.9cm3的组织样本块[3]于离心管，储存于-80℃冰箱，基于ELISA方法、PCR技术检测各组织的SP、CGRP释放值。
2.4 统计学及检测方法：SPSS17.0软件进行统计学分析，结果用 x±s 形式表示。严格按照家兔SP、CGRP的ELISA、PCR试剂盒说明书操作。
3.结果
3.1基于ELISA法检测不同药性苗药穴位刺激结果：ELISA方法检测出不同干预条件下SP、CGRP释放量。图1所示，辛热苗药白条松，三百棒穴位贴敷艾灸后SP相对表达量明显较高于其他组（P<0.05）。图2所示，辛热苗药白条松，三百棒穴位贴敷艾灸后CGRP相对表达量明显高于青风藤、单灸及空白组（P<0.05）。
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4 讨论
与平性药青风藤、寒性药三加皮相比，苗药三百棒、白条松通过隔药艾灸的方式更能促进RA家兔局部刺激强度，更容易引起穴位神经递质分泌。推测与辛热药性的苗药中成分相关。三百棒和白条松皆有挥发油类成分，三百棒中主含[4]葎草烯和石竹烯，白条松中主含亚油酸、l-(+)-抗坏血酸-2等，具有的镇痛抗炎药理作用，也有一定的促吸收作用[5]，能促进药物透过皮肤、粘膜等，产生较强的穴位刺激性，因此临床常用大辛大热的类中药进行穴位贴敷，借助药物辛热之性达到祛寒除湿之功，引起神经递质的一系列反应，起到调节作用。
隔药灸的作用机制包含了药物本身药理作用、光、热、烟、穴位刺激作用等综合作用，其作用机制尚不完全明确，特别是药物借助艾灸的光热效应在体内吸收、分布、代谢过程与传统经皮给药的体内过程存在哪些区别并不清楚，这导致了当前临床用药出现选药单一、用药粗放的情况，因此需要对隔药灸用药规律、体内过程进行深入研究，特别是借助药理特性结合穴位刺激作用，使其使用从单方用药到配伍用药，从简单外敷到现代制剂，以便更好服务于当今临床应用，为开发苗药新品种打下理论基础。
参考文献
[1]罗文,杨原芳,黄丽容.隔药灸脐治疗脾肾阳虚型慢性疲劳综合征的临床观察[J].浙江中医药大学学报,2019,43(12):1380-1384.
[2]李博林.基于代谢组学的冬病夏治穴位贴敷防治支气管哮喘作用机制及临床疗效研究[D].河北医科大学,2016.
[3]高远,李永吉,张弘.青藤外敷散模型家兔膝关节经穴、非经穴部位皮肤渗透性比较[J].中成药,2017,39(06):1291-1293.
[4]傅瑶,李颜,霍炎,郭澄.威灵仙挥发油的超临界萃取工艺优化及GC-MS分析[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(07):41-45.
[5]黄罗生,顾燕飞,李红.中药挥发油及芳香性药物的研究进展[J].中国中药杂志,2009,34(12):1605-1611.