王文娟1 ，梅勇1，龙涛1，李建华1，杨莉1，叶修文1，杨红菊1，郭娟1，粟冲1
1.重庆希尔安药业有限公司 重庆 401520
2.摘要 目的：采用胃肠复元提取清膏制备胃肠复元膏，建立HPLC法测定胃肠复元膏中标志性成份大黄素和大黄酚的总含量。方法：以胃肠复元膏原药材提取清膏与炼蜜制备胃肠复元膏、采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%的磷酸溶液(85:15)为流动相；254nm波长处测定大黄素和大黄酚的总含量。结果：研制出可工业化生产的胃肠复元膏工艺，高效液相色谱法可同时测定大黄素和大黄酚的总含量，大黄素和大黄酚的进样量分别在0.0192～0.192μg、0.03136～0.3136μg范围内呈良好的线性关系，线性方程分别y= 4077926.44x-1251.26（r＝1.0），y= 5519832.33x-3030.83（r＝1.0）。大黄素和大黄酚平均加样回收率分别为98.1%和99.2%，RSD分别为0.35%，0.69%。结论： 制备工艺适合工业化生产，本法采用一个HPLC色谱条件同时检测两种标志性成份，方法专属性强、准确度高，重复性好，节约检测时间，可作为胃肠复元膏的质量控制方法。
关键词 胃肠复元膏；制备；高效液相色谱法；大黄素；大黄酚；含量
胃肠复元膏是由麸炒枳壳、太子参、大黄、蒲公英、炒莱菔子、木香、赤芍、紫苏梗、黄芪、桃仁共十味中药组成，具有益气活血，理气通下的功效。用于胃肠术后腹胀、胃肠活动减弱，症见体乏气短、脘腹胀满、大便不下；亦可用于老年性便秘及虚性便秘。其中，在胃肠复元膏处方中大黄作为臣药起着重要的泻下攻积，泻火解毒，活血祛瘀，清泄湿热之功效[1]。其标志性成份包括大黄素、大黄酚等，因此在研究中将大黄素和大黄酚作为指标含量控制，保证产品质量非常关键。为了提高胃肠复元膏产品的质量，笔者研究了该品的生产工艺，并研究了一种高效液相色谱法能快速测定成品中大黄素和大黄酚的总含量，可作为通过产品质量标准的检测依据。
1 仪器与试药
1.1仪器 岛津LC-2030HPLC色谱仪，紫外检测器、LabSolutions色谱工作站；CP225D型电子分析天平（北京塞多利斯）、KQ5200B超声清洗器（昆山科学仪器有限公司）。
1.2 试药 蜂蜜（食品级，重庆唐氏蜂业有限公司）、大黄素对照品（批号：110756-201512 含量99.7%）于中国食品药品检定研究院。大黄酚（批号：110796-201621，含量99.2%）购于中国食品药品检定研究院、(批号:110822 -20040， 供含量测定用，中国药品生物制品检定所)。胃肠复元提取清膏（170801，重庆希尔安药业有限公司提供）。胃肠复元膏（批号：170901、170902、170901，由重庆希尔安药业有限公司提供）；甲醇为色谱纯，水为纯化水，磷酸以及其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1胃肠复元膏的制备
（1）炼蜜：将处方量的蜂蜜置夹层锅中，开启蒸汽阀门加热至沸，升温至105～112℃，不断搅拌，捞去漂浮的杂质及泡沫，冷却后即得炼蜜。
（2）胃肠复元膏的制备：称取处方量的清膏、炼蜜和大黄粉。把称量好的清膏投入配制罐中，开启蒸汽阀门加热至沸，调整阀门使其保持微沸，边搅拌边加入炼蜜和大黄粉，继续充分搅拌均匀即得胃肠复元膏。
2.2 大黄素和大黄酚总含量测定
2.2.1检测波长的确定
取含大黄素9.6μg/ml对照品溶液与含大黄酚15.68μg/ml的对照品溶液，照紫外-可见分光光度法，分别在190nm～400nm波长范围内进行扫描，结果大黄素和大黄酚均在254nm波长处有最大吸收，因此确定大黄素和大黄酚的检测波长均为254nm。
2.2.2 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Venusil，MP C18（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇-0.1%的磷酸溶液(85:15)为流动相，流速为1.0ml/min，柱温：30℃；检测波长：254nm，在此色谱条件下，大黄素和大黄酚的分离均大于2.0，理论板数按大黄素峰计算均大于3000，系统适用性符合要求。
2.2.3 对照品和供试品溶液的制备（1）分别取大黄素和大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含大黄素6μg、大黄酚15μg的混合溶液，即得对照品溶液。（2） 取本品1.5g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流提取3小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液10ml，置锥形瓶中，水浴蒸至近干，加盐酸-30%乙醇（1:10)的混合溶液15ml，置水浴中加热1小时，放冷，用三氯甲烷振摇提取4次，每次15ml,合并三氯甲烷液，回收三氣甲烷液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。
2.2.4 阴性对照溶液的配制 按“2.2.3”项下的方法，制备不含大黄药材的阴性对照溶液。
2.2.5 专属性试验 在该的色谱条件下，大黄素、大黄酚与样品中其它组分色谱峰可基线分离，阴性对照无干扰，表明该方法的专属性好。
2.2.6 线性关系考察 研究结果显示：大黄素进样量0.0192～0.192μg范围内，峰面积与进样量呈良好线性关系，线性方程为y= 4077926.44x-1251.26，相关系数R=1.0，大黄酚进样量0.03136～0.3136μg范围内，峰面积与进样量呈良好线性关系，线性方程为y= 5519832.33x-3030.83，相关系数R=1.0，均符合含量测定分析方法验证的可接受标准。
2.2.7 精密度试验 研究结果显示：对照品溶液连续进样6次，大黄素RSD%为0.2%；大黄酚RSD为0.1%，测定结果表明该测定方法的仪器精密度良好。
2.2.8 稳定性试验 取供试品溶液和对照品溶液于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时分别进样测定，测定大黄素和大黄酚的峰面积值，供试品RSD（％）分别为0.84%和0.65%，对照品RSD（％）分别为0.74%和0.55%，表明对照品和供试品溶液在6h内稳定。
2.2.9 重复性试验 6次重复操作，大黄素和大黄酚的含量检测结果的RSD分别为1.12%和1.21%，表明重复性好。
2.2.10 准确度 大黄素9份样品回收率平均值为98.1%，RSD为0.35%；大黄酚9份样品回收率平均值为99.2%，RSD为0.69%，该方法准确度好。
2.2.11 样品测定 取3批胃肠复元膏大生产样品，按照2.2.3方法制备供试品和对照品溶液，进样测定，按外标法计算大黄素和大黄酚的总含量，170901批、170902批和170903批大黄素和大黄酚的总含量分别为1.37mg/g、1.38mg/g和1.38mg/g。测定结果表明各批成品中大黄素和大黄酚的总含量稳定。
3 讨论
大黄为胃肠复元膏方中臣药，具有泻下攻积，泻火解毒，活血祛瘀，清泄湿热之功效。大黄素和大黄酚作为《中国药典》收载类似品种的含量测定成分。故最终选择大黄素和大黄酚总含量作为本制剂的质控指标。该品工艺成熟，成品中大黄素和大黄酚的总含量非常稳定，产品质量优异。
参考文献
[1] 张斌，陈如华，王国栋，李青松，范为新.胃肠复元膏治疗腹部术后并发症112例临床观察[J].江苏中医药，2003,24(2)：30-30.