苏达拉勒
内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110
【摘要】目的：建立肺热朱砂五味丸中甘草甘、甘草酸按的HPLC测定方法。方法：色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸为流动相B，按《中国药典》（2015版）中饮片甘草的相关规定梯度洗脱，检测波长为237nm，色谱柱温度为30 ℃。结果：甘草苷和甘草酸铵分别在0.9983~19.9925(μg/ml)， 9.814~199.4983(μg/ml) 范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=1， r=0.9999），平均含量分别为 1.4869μg/ml ， 22.4524μg/ml。结论：甘草苷、甘草酸铵的含量测定方法先进又简便，专属性强，重复性好，准确度高，可用于肺热朱砂五味丸的质量控制。
【关键词】HPLC；肺热朱砂五味丸；甘草苷；甘草酸铵
Abstract: Objective: To establish a HPLC method for the determination of glycyrrhizin and glycyrrhizin in Feirezhusa Wuwei Pills. Methods: The chromatographic conditions were as follows: octadecylsilane bonded silica gel as the filling agent, acetonitrile as mobile phase A, 0.05% phosphoric acid as mobile phase B, gradient elution was performed according to the relevant regulations of licorice decoction pieces in Chinese Pharmacopea (2015 edition), detection wavelength was 237nm, and column temperature was 30 ℃. Results: Glycyrrhizin and ammonium glycyrrhizinate were linear in the range of 0.9983~19.9925(μg/ mL), 9.814~199.4983(μg/ mL) and peak area (r=1, r=0.9999), and the average contents were 1.4869μg/ mL, respectively. 22.4524 mu g/ml. Conclusion: The content determination method of glycyrrhizin and ammonium glycyrrhizinate is advanced and simple, with strong specificity, good repeatability and high accuracy, which can be used for the quality control of Feirezhusha Wuwei pills.
Keywords: HPLC; Lung hot cinnabar five flavor pills; Licorice glycosides; Ammonium glycyrrhetate.
肺热朱砂五味丸由朱砂（制）25g、甘草25g、川贝母25g、天竺黄50g、寒水石(制)200g等药物共研细末，制成的丸剂。功能与主治：清热，止咳。主治肺热，咳嗽，天花，麻疹引起的咳嗽等，收载于《传统蒙药与方剂》［1］。甘草为为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat、或光果甘草Glycyrrhiza glabra L .的干燥根和根茎，春、秋二季采挖，除去须根，晒干［2］。甘草中的主要成分为甘草苷、甘草酸和异甘草素等［3］。甘草苷和甘草酸铵具有抗氧化、抗炎等作用［4-6］。通过本次实验对蒙药肺热朱砂五味丸中所含甘草苷及甘草酸铵用HPLC法进行含量测定，建立肺热朱砂五味丸中甘草甘、甘草酸按的HPLC测定方法，为该方剂的质量标准的建立提供参考依据。
1.实验材料
1.1实验药物及试剂
肺热朱砂五味丸（批号：20200430、20200602、20200223，本方剂由内蒙古国际蒙医医院提供）；甘草、朱砂、寒水石、川贝母、天竺黄等饮片（饮片由内蒙古国际蒙医医院提供）；甘草苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号111610-201908）；甘草酸铵对照品（中国药品生物制品检定所，批号110731-202021）；乙腈为色谱纯；其他试剂为分析纯；水为纯化水。
1.2实验仪器
Thermo U3000高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技（美国赛默飞公司）；KQ-250DE超声波清洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）。
2.实验方法与结果
2.1溶液制备
2.1.1供试品溶液制备：取本品粉末（过三号筛）约0.65g , 精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇25ml,密塞,称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.1.2对照品溶液制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量,精密称定，加30%乙醇分别制成每lml含甘草苷20μg、甘草酸铵0.2mg的溶液，即得。
2.1.3阴性对照溶液制备：取甘草除外的单药按本制剂配伍规律照供试品溶液制备方法制备，即得。
2.2色谱条件与系统适用性实验
以十八烷基硅烷键合硅胶（Agilone eclipse EDB-C18(4.6*250mm)）为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05% 磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
2.3方法学考察
2.3.1专属性实验：精密量取“ 2.1”项下对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各 10μL，按“2.2”项下方法测定。阴性样品溶液，在与对照品溶液和供试品溶液色谱峰相应保留时间无吸收峰，结果表明，其他组分对测定无干扰。各色谱图见图 1。
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2.3.2线性关系考察
精密量取“2.1”项下甘草苷、甘草酸铵对照品溶液1μL、4μL、8μL、12μL、16μL、20μL，按“2.2”项色谱条件下进样测定，结果见表1。
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2.3.3精密度试验
精密量取“2.1”项下供试品溶液溶液10μL，按“2.2”项色谱条件下进样测定6次，测得甘草苷、甘草酸铵峰面积RSD分别为0.32%、0.26%，表示仪器精密度良好。
2.3.4重复性试验
取同一批制剂（批号20200223）6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项色谱条件下进样测定，测得甘草苷、甘草酸铵峰面积RSD分别为1.88%、2.00%，表明该方法重复性良好。
2.3.5稳定性试验
取同一份“2.1”项下供试品溶液，室温下分别于0h、1h、2h、4h、8h、12h在“2.2”项色谱条件下进样测定，测得甘草苷、甘草酸铵峰面积RSD分别为0.46%、0.28%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。
2.3.6加样回收率试验
精密称取各成分含量已知的同一批制剂粉末0.325g，共9份，加入适量甘草苷、甘草酸铵对照品溶液，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，在“2.2”项色谱条件下进样测定，计算回收率得甘草苷、甘草酸铵平均回收率分别为98.66%、99.24%，RSD分别为0.59%、0.79%。
2.3.7样品含有量测定
取三批制剂粉末，按“2.1”项分别制备三份供试品溶液，在“2.2”项色谱条件下进样测定，外标法计算含有量，结果见表3。
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3.讨论
在参考相关文献基础上［6-12］本文考察了不同浓度乙醇提取方式、洗脱梯度和时间，发现30%乙醇提取30min时峰面积、出峰率最理想，而且相应色谱峰分离度、理论塔板数均符合规定。
4.结论
本实验建立了蒙药朱砂五味丸中甘草苷、甘草酸铵含量HPLC测定方法，该方法操作简单、专属性强、重复性及准确度良好、为本制剂质量标准研究提供科学有效的实验依据。
参考文献
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