吴星月1, 2，王新民1 ，赵丽丽1
1.河南牧业经济学院，河南 郑州450046；2.河南科技大学 洛阳 471000
摘 要
选取4个不同产地的淫羊藿药材，以超声法对药材进行提取，采用HPLC法对淫羊藿中淫羊藿苷和朝藿定C含量进行测定，结果得出4个产地淫羊藿药材中淫羊藿苷含量顺序为：东北（0.972%）＞四川（0.902%）＞甘肃（0.828%）＞河南（0.753%）；朝藿定C含量顺序为：甘肃（1.136%）＞东北（0.500%）＞河南（0.411%）＞四川（0.269%）。4个产地淫羊藿药材中有效成分含量存在较大差异，以淫羊藿苷为质量评价标准，东北地区淫羊藿药材质量最好。
关键词: 淫羊藿；HPLC；产地；成分含量
淫羊藿（Epimedium）为小檗科植物淫羊藿（Epimedium brevicornu Maxim.）的干燥叶，具有补肾壮阳、强健筋骨之功效。淫羊藿分布广、种类多，质量参差不齐，严重影响了淫羊藿药材临床用药和新药开发。因此，对不同产地淫羊藿药材进行质量研究势在必行。本试验利用高效液相色谱法，对所采集的4个产地的淫羊藿药材进行测定，分析其差异，以期为药材种植基地生产及质量控制提供些许理论依据。
1 仪器与试材
主要仪器有莱伯泰科LC-600型高效液相色谱仪、北京普析TU-1810紫外分光度计、高速粉碎机、超声仪及电子天平等。
所用试材有淫羊藿苷对照品（T2158B40472）、朝藿定C对照品（19112375），及甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、超纯水等；河南、东北、甘肃及四川4个产地淫羊藿药材采购于亳州药材市场。
2样品的制备
2.1 供试品溶液的制备
将河南、东北、甘肃及四川等4种淫羊藿药材进行粉碎，过3号筛，分别精密称定约0.2 g，转移至50 mL具塞锥形瓶中，标记，精密量取50%乙醇20 mL依次加入，称定锥形瓶重量，超声处理1 h，再称定重量，减失重量用50%乙醇补充，摇匀后用0.45 μm滤膜滤过，即得，重复2次。
2.2对照品溶液的制备
将淫羊藿苷对照品于105℃干燥至衡重，精密称定2.508 mg，完全转移至10 mL容量瓶，用色谱纯甲醇超声溶解，定容得到每1 mL含0.2508 mg的淫羊藿苷对照品溶液。
精密称取朝藿定C对照品5.094 mg，完全转移至5 mL容量瓶，加50%乙醇超声溶解，定容作为对照品贮备液；精确量取对照品贮备液2.5 mL置10 mL容量瓶，加50%乙醇稀释并定容，得朝藿定C对照品溶液(0.2547 mg/mL)。
3有效成分含量测定
3.1 HPLC色谱条件
测定淫羊藿苷：LabTech C18色谱柱，流动相为乙腈-水（30∶70），流速1.0 mL/min，柱温30℃，检测波长为270 nm。理论塔板数按淫羊藿苷峰计不低于1500。
测定朝藿定C：LabTech C18色谱柱，流动相为乙腈-水(25∶75)，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，检测波长270 nm。理论塔板数以朝藿定C峰计不低于6000。
3.2方法学考查
3.2.1稳定性试验
制备淫羊藿样品溶液后0、6、12、24和48 h，按照“3.1”项测定淫羊藿苷和朝藿定C，得色谱参数，计算2种成分峰面积的RSD分别为0.84%和0.90%。表明48 h内供试品溶液稳定性良好。
3.2.2 精密度试验
按照“3.1”项色测定淫羊藿苷和朝藿定C对照品溶液，连续进样6次，根据色谱峰参数，计算其峰面积的RSD为0.58%和0.76%，表明HPLC仪器精密度良好。
3.2.3 重复性试验
按照“3.1”项测定制备好的淫羊藿供试品溶液6次，根据色谱参数，计算2种成分峰面积的RSD分别为0.88%和0.92%，表明该方法重复性良好。
3.3 含量测定
分别将处理好的供试品溶液和对照品溶液用100 μL进样器进样测定。得到色谱图，依据相应色谱峰面积计算含量。
4 结果与分析
HPLC法测定4产地淫羊藿中淫羊藿苷和朝藿定C含量结果见表1。4个不同产地淫羊藿样品中淫羊藿苷和朝藿定C色谱峰保留时间分别在6 min和15.8 min附近。理论塔板数大于中国药典规定，拖尾因子均接近1，且峰分离效果好。
表1 不同产地淫羊藿中淫羊藿苷和朝藿定C含量测定结果
成分 产地 保留时间（min） 峰分离度 理论塔
板数 峰拖尾因子 取样量/g 含量（%）
淫
羊
藿
苷 河南 5.915 3.60 4600 1.03 0.1998 0.753
东北 5.920 3.30 3603 0.99 0.2007 0.972
甘肃 5.912 3.27 3557 0.96 0.2009 0.828
四川 5.917 2.25 5204 0.98 0.2036 0.902
朝
藿
定
C 河南 15.838 1.20 3726 1.03 0.2009 0.411
东北 15.837 0.97 4443 0.98 0.2025 0.500
甘肃 15.813 1.24 3883 0.87 0.2014 1.136
四川 15.885 1.39 5319 0.95 0.1996 0.269
4产地淫羊藿药材中淫羊藿苷含量顺序为东北（0.972%）＞四川（0.902%）＞甘肃（0.828%）＞河南（0.753%），而朝藿定C含量顺序为甘肃（1.136%）＞东北（0.500%）＞河南（0.411%）＞四川（0.269%）。邓爱平等研究得出甘肃产淫羊藿中淫羊藿苷含量要高于其它地区，与本次试验所得东北地区淫羊藿苷含量最高存在差异。张华峰等将淫羊藿药材在50℃下超声提取，测得河南和甘肃产淫羊藿苷含量分别为0.6850%和0.9603%，与本试验有一定差异，推测可能是提取温度不同造成的。李晓龙等测定四川产21种淫羊藿中朝藿定C含量，得宝兴朝藿定C含量为0.270%，与本次试验测得结果相近。雷永涛等测定甘肃和吉林产淫羊藿药材中朝藿定C含量分别为1.177%和0.982%，与本次试验测得甘肃产药材中朝藿定C含量最高为1.136%一致。
参考文献
[1]中国药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[S]．北京：中国医药科技出版社．
[2]邓爱平, 方文韬, 周青罡, 等. 淫羊藿质量影响因素及质控对策分析[J].中国中药杂志, 2018, 43(05): 1062-1070.
[3]张华峰, 高翔, 卢大炎, 等. HPLC法同时测定淫羊藿中朝藿定A、B、C与淫羊藿苷的含量[J]. 分析测试学报,2007(02): 198-201.
[4]李晓龙, 刘虹宇, 曹佩雪, 等. HPLC同时测定21种淫羊藿中朝藿定C和淫羊藿苷的含量[J]. 药物分析杂志, 2011, 31(05): 931-934.
[5]雷永涛, 梁妍, 郝小燕, 等. 不同产地淫羊藿中4种活性成分含量的高效液相色谱法测定[J]. 时珍国医国药, 2013, 24(06): 1404-1405.
基金项目: 河南省教育厅重点项目(19B360002)；河南牧业经济学院院级重点培育学科-中兽药生药学项目(41000003)
作者简介: 吴星月（1998—），女，河南洛阳人，在读研究生
＊通讯作者：王新民（1973—），男，博士，副教授，从事中药制剂分析方面的教学及科研工作